目的:研究单链抗体(scFv)在不同载体和菌株中的表达以及表达产物的生物学活性评价。方法:将人源化单链抗体的基因通过酶切,连接等生物技术的方法克隆到pET28a, pET32a 和 pET-EI:X 三种不同的载体中,并选用不同的表达菌株进行表达,观察单链抗体的表达情况并对抗体的溶解性表达进行优化,采用亲和层析和分子筛层析对目的蛋白进行纯化,并在体外研究目的蛋白的生物学活性。结果:抗结缔组织生长因子单链抗体在pET28a/BL21(DE3) 中不能表达,在pET32a/ BL21(DE3) 和 pET-EI:X/BLR(DE3)中均成功表达,但是在pET-EI:X/BLR(DE3) 中scFv 抗体无法从内含肽(intein)上裂解。scFv在pET32a/ BL21(DE3) 中表达量占总蛋白的30% 左右,经过两步层析纯化后,纯度达到85%以上。体外免疫试验显示目的蛋白具有良好的生物活性。结论:人源化抗结缔组织生长因子单链抗体scFv在大肠杆菌中的表达需要分子伴侣,通过低温表达策略在pET32a/ BL21(DE3)中成功得到表达并具有良好生物活性。 |