目的:探讨RhoA蛋白通路在DLC1(frequentlydeletedinlivercancer1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制。方法:构建pcDNA3.1DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pulldown方法分析RhoA蛋白活性;实时定量PCR检测细胞周期相关蛋白CyclinD1、p21的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果:野生型人结肠癌HT29细胞DLC1基因表达呈阴性,经转染获得DLC1稳定表达细胞系。与野生型及空载组HT29细胞相比,转染组细胞RhoA蛋白活性下降;CyclinD1表达下调,p21表达上调;G1期及凋亡细胞数增加,而G2期细胞数下降。结论:转染DLC1基因引起人结肠癌HT29细胞RhoA蛋白活性下调,进而可能通过对CyclinD1、p21表达的调控使细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,同时分裂前期细胞数减少,细胞增殖受抑。 |