目的:建立转录丙型肝炎病毒(HCV)结构区基因的细胞模型,为研究中药在体外对HCV结构区基因转录的抑制作用提供实验用细胞模型.方法:用脂质体将已构建好的含HCV结构区基因1.73kb的真核细胞表达载体pBK-CMV转入人HeLa细胞,用G418选择性培养基筛选出成功转染的HeLa细胞(HeLaD细胞),用Trizol提取HeLaD细胞的总RNA,通过特异性引物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从mRNA水平来验证HeLaD细胞中HCV结构区基因的有效转录.结果:对从HeLaD细胞抽提的总RNA作RT-PCR,得到144bp的特异的扩增片段,证实HCV结构区基因在HeLaD细胞中有转录水平的表达.结论:重组质粒pBK-CMV能被成功地转染人HeLa细胞,且HCV的结构区基因能够有效地表达,成功建立了能转录HCV结构区基因的细胞模型-HeLaD. |