目的:表达与提纯活性SET7/9融合蛋白质(GST-SET7/9融合蛋白)。方法:以含人SET7/9基因结构域全长cDNA的pCMV-Tag5B-SET7/9质粒为模板,聚合酶链反应法(PCR)扩增获得目的基因片段,将测序正确的目的基因片段经EcoR I与Xho I双酶切,插入载体pGEX-6P-3中,构建重组质粒经转化与IPTG诱导表达,并提纯该融合蛋白质。通过琼脂糖凝胶电泳、DNA测序、SDS-PAGE蛋白电泳法鉴定重组质粒及融合蛋白表达的正确性;并采用组蛋白甲基化转移酶(HMT)测定法鉴定功能。结果:构建了重组质粒pEGX-SET7/9,获得了相对分子质量约为77000纯化融合蛋白质,其CPM值明显高于对照组(P<0.01),且与作用时间呈正相关。结论:构建的重组质粒pEGX-SET7/9可以表达活性GST-SET7/9融合蛋白。 |