目的:构建ADAM9(去整合素金属蛋白酶9)基因真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞) 方法:利用ADAM9全长编码核酸序列作为模板,用PCR扩增其核心编码区,将其克隆至PMD18-T Vector中,构建PMD18-T-ADAM9质粒,同时双酶切PMD18-T-ADAM9及PXJ40-HA后,构建PXJ40-HA-ADAM9真核表达载体,经酶切鉴定及测序后将载体转染至293T细胞中,通过免疫印记法检测ADAM9蛋白的表达 结果:经过双酶切和测序结果鉴定PXJ40-HA-ADAM9载体构建成功,经过Western blot法证实ADAM9基因表达。 结论:成功克隆ADAM9核心编码区,并构建其真核表达载体,该载体的构建为后期建立稳定表达ADAM9细胞模型, 并稳定表达ADAM9蛋白,为进行ADAM9功能研究提供可能。 |